γ干擾素ELISA檢測(cè)試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法,檢測(cè)釋放至血漿中的γ-干擾素,根據(jù)γ-干擾素水平判斷被檢牛是否感染過牛分枝桿菌。檢測(cè)準(zhǔn)確:預(yù)先包被的抗體是IFNγ單克隆抗體。檢測(cè)相抗體也是IFNγ單克隆抗體,并經(jīng)生物素標(biāo)記。樣品和生物素標(biāo)記抗體先后加入酶標(biāo)板孔反應(yīng)后,PBS或TBS洗滌。隨后加入過氧化物酶標(biāo)記的親和素反應(yīng);經(jīng)過PBS或TBS的洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人IFNγ呈正相關(guān)。
γ干擾素ELISA檢測(cè)試劑盒使用的基本原理有:
1. 抗原或抗體能以物理性地吸附于固相載體表面,或是蛋白和聚苯乙烯表面間的疏水性部分相互吸附,并保持其免疫學(xué)活性;
2. 抗原或抗體可通過共價(jià)鍵與酶連接形成酶結(jié)合物,而此種酶結(jié)合物仍能保持其免疫學(xué)和酶學(xué)活性;
3. 酶結(jié)合物與相應(yīng)抗原或抗體結(jié)合后,可根據(jù)加入底物的顏色反應(yīng)來判定是否有免疫反應(yīng)的存在,而且顏色反應(yīng)的深淺是與標(biāo)本中相應(yīng)抗原或抗體的量成正比例的,因此,可以按底物顯色的程度顯示試驗(yàn)結(jié)果。
γ干擾素ELISA檢測(cè)試劑盒的使用注意事項(xiàng)有哪些?
實(shí)驗(yàn)開始前,各試劑均應(yīng)平衡至室溫;試劑或樣品稀釋時(shí),均需混勻,混勻時(shí)盡量避免起泡。實(shí)驗(yàn)前應(yīng)預(yù)測(cè)樣品含量,如樣品濃度過高時(shí),應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行稀釋,以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測(cè)范圍,計(jì)算時(shí)再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。底物請(qǐng)避光保存。
試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡十五到三十分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。