細胞培養(yǎng)是指在體外模擬體內(nèi)環(huán)境(無菌、適宜溫度、酸堿度和一定營養(yǎng)條件等),使之生存、生長、繁殖并維持主要結(jié)構(gòu)和功能的一種方法。要達到細胞生長所需的條件,需要借助細胞耗材來實現(xiàn)。培養(yǎng)瓶適合長期培養(yǎng)、傳代、作為種子細胞,瓶口較小,細胞不易被污染。廣泛應(yīng)用于細胞生物學(xué)、病毒學(xué)、微生物學(xué)和制藥行業(yè)等領(lǐng)域。
細胞培養(yǎng)瓶的使用流程:
1、擰開蓋子,用傾斜或者泵打的方式將培養(yǎng)基注入細胞工廠內(nèi),細胞懸液緩慢流入細胞工廠各層中。蓋上蓋子,靜止。
2、緩慢將細胞工廠測立,有加液口的一側(cè)背向自己,靜置使細胞懸液緩慢均勻流入各層中。
3、側(cè)向旋轉(zhuǎn)九十度,保持進液口朝上,靜置使細胞懸液緩慢均勻流入各層中。
4、雙手握住進液口的一面,緩慢放平,避免液體大幅度晃動。
5、移致合適的培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。
6、培養(yǎng)結(jié)束后,將培養(yǎng)基倒入收集容器。
細胞培養(yǎng)時生長減慢的原因和解決辦法如下:
原因:更換了不同的培養(yǎng)液或血清;培養(yǎng)液中一些細胞生長必需成分如谷氨酰胺或生長因子等耗盡或缺乏或已被破壞;培養(yǎng)物中有少量細菌或真菌污染;試劑保存不當(dāng);比較新培養(yǎng)液與原培養(yǎng)液組分,比較新血清與舊血清支持細胞生長實驗找到可能的原因。
解決辦法:
增加起始培養(yǎng)細胞濃度;讓細胞逐漸適應(yīng)新培養(yǎng)液;換入新鮮配制培養(yǎng)液;補加谷氨酰胺或生長因子等;用無抗生素培養(yǎng)液培養(yǎng),如發(fā)現(xiàn)污染,丟棄培養(yǎng)物,或用抗生素除菌;血清需保存在-5℃到-20℃;培養(yǎng)液需在2-8℃避光保存;含血清培養(yǎng)液在2-8℃保存,并在兩周內(nèi)用完;分離培養(yǎng)物,檢測支原體。