RPMI 8226人多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞

簡稱：RPMI 8226

中文名：人多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞

別名：RPMI 8226; RPMI.8226; RPMI8226; RPMI no 8226; 8226; RPMI 8226/S; RPMI-8226S; RPMI8226/S; 8226/S; Roswell Park Memorial Institute 8226; GM02132; GM2132; GM 2132; Simpson

種屬：人

來源：漿細(xì)胞骨髓瘤；男性

培養(yǎng)條件：1640+10%FBS+1%雙抗

培養(yǎng)環(huán)境：air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5%

狀態(tài)：懸浮

NOTE: FOR RESEARCH USE ONLY.

細(xì)胞培養(yǎng)操作步驟：

1. 吸走多余培養(yǎng)基，加入3-5mL PBS后輕輕晃動培養(yǎng)瓶潤洗細(xì)胞；

2. 吸干凈PBS后

加入1mL 0.25%胰-酶-0.53mM EDTA，輕輕搖晃培養(yǎng)皿使胰-酶浸沒細(xì)胞表面，培養(yǎng)瓶放37度培養(yǎng)箱消化；

（細(xì)胞對于消化比較敏感，消化過度會嚴(yán)重影響細(xì)胞狀態(tài)，導(dǎo)致細(xì)胞傳代死亡漂浮或者傳代后不長。細(xì)胞消化到細(xì)胞間隙變大但未脫落，可以輕輕吹下時即可終止，禁止消化到細(xì)胞*漂浮?；靹蚣?xì)胞時盡量輕柔，不要吹出大量氣泡。）

3. 加入6-8ml*培養(yǎng)基終止消化，輕輕吹下細(xì)胞混勻；

4. 將混勻的細(xì)胞1000rpm（約150g）離心3min，棄上清，再用新鮮培養(yǎng)基重懸37度培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)；

傳代比例: 不同細(xì)胞生長速度不一，具體傳代比例視細(xì)胞生長速度而定，大部分細(xì)胞適用1:3-1:4傳代，生長較慢的細(xì)胞可以1:2傳代。

注意事項(xiàng)：不同品牌胰酶消化時間差別較大，注意嚴(yán)格控制消化時間
消化傳代細(xì)胞時吹打細(xì)胞注意盡量輕柔，不要產(chǎn)生過多氣泡以免影響細(xì)胞狀態(tài)。

Cell cryopreservation

1.凍存液：92%*培養(yǎng)基+8%DMSO（可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)室條件自行選擇）

2.降溫步驟：4度10min，-20度2h，-80過夜后液氮保存。

凍存方法：

1.消化并離心獲得細(xì)胞沉淀后，加配置好的凍存液輕輕重懸細(xì)胞；
2.將細(xì)胞懸液盡快移入已經(jīng)做好標(biāo)記的凍存管；
3.將凍存管轉(zhuǎn)入程序凍存盒，放入-80度冰箱過夜，第二天轉(zhuǎn)入液氮保存；沒有程序凍存盒的實(shí)驗(yàn)室，加入細(xì)胞后可以將凍存管放在泡沫盒中4度靜置5-10min，再-20度靜置2h后轉(zhuǎn)入-80度過夜，第二天轉(zhuǎn)入液氮保存。

Tips：
1.細(xì)胞半貼壁圓形生長，部分懸浮圓形，傳代時均可收集培養(yǎng)，換液時將懸浮細(xì)胞離心收集后重新接回原瓶，若貼壁細(xì)胞較多活性較好時可以不要懸浮的細(xì)胞；
2.傳代有部分細(xì)胞碎片可以換液后用PBS潤洗細(xì)胞清除，使用的PBS需要恢復(fù)到室溫，加入時不要沖到細(xì)胞面，潤洗盡量輕柔；
3.該細(xì)胞生長偏慢，比較容易死亡，不建議沒有相關(guān)細(xì)胞操作經(jīng)驗(yàn)的客戶單獨(dú)培養(yǎng)該細(xì)胞。

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