簡(jiǎn)要描述:基質(zhì)金屬蛋白酶ELISA kit用于測(cè)定人、小鼠、大鼠、倉(cāng)鼠、豚鼠、豬、兔子血清,血漿及相關(guān)液體樣本中基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制因子1(TIMP-1)、基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子4(TIMP-4)、基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子3(TIMP-3)、基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子2(TIMP-2)、基質(zhì)金屬蛋白酶11(MMP11)、基質(zhì)金屬蛋白酶9/明膠酶B(MMP-9/Gelatinase B)、基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子1
詳細(xì)介紹
品牌 | YLKBIO | CAS | 詳見(jiàn)說(shuō)明書(shū) |
---|---|---|---|
分子式 | 詳見(jiàn)說(shuō)明書(shū) | 純度 | 詳見(jiàn)說(shuō)明書(shū) |
分子量 | 詳見(jiàn)說(shuō)明書(shū) | 貨號(hào) | YLK-1005E |
規(guī)格 | 50T | 供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
主要用途 | 科研 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工,生物產(chǎn)業(yè) |
基質(zhì)金屬蛋白酶ELISA kit
本試劑盒僅供研究使用。
使用目的:
本試劑盒用于測(cè)定人、小鼠、大鼠、倉(cāng)鼠、豚鼠、豬、兔子血清,血漿及相關(guān)液體樣本中基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制因子1(TIMP-1)、基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子4(TIMP-4)、基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子3(TIMP-3)、基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子2(TIMP-2)、基質(zhì)金屬蛋白酶11(MMP11)、基質(zhì)金屬蛋白酶9/明膠酶B(MMP-9/Gelatinase B)、基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子1(TIMP-1)、基質(zhì)金屬蛋白酶2/明膠酶A(MMP-2/Gelatinase A)、基質(zhì)金屬蛋白酶5(MMP-5)、基質(zhì)金屬蛋白酶10(MMP-10)、基質(zhì)金屬蛋白酶13(MMP-13)、基質(zhì)金屬蛋白酶7(MMP-7)活性。
實(shí)驗(yàn)原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制因子1(TIMP-1)、基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子4(TIMP-4)、基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子3(TIMP-3)、基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子2(TIMP-2)、基質(zhì)金屬蛋白酶11(MMP11)、基質(zhì)金屬蛋白酶9/明膠酶B(MMP-9/Gelatinase B)、基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子1(TIMP-1)、基質(zhì)金屬蛋白酶2/明膠酶A(MMP-2/Gelatinase A)、基質(zhì)金屬蛋白酶5(MMP-5)、基質(zhì)金屬蛋白酶10(MMP-10)、基質(zhì)金屬蛋白酶13(MMP-13)、基質(zhì)金屬蛋白酶7(MMP-7)水平。用純化的基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制因子1(TIMP-1)、基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子4(TIMP-4)、基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子3(TIMP-3)、基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子2(TIMP-2)、基質(zhì)金屬蛋白酶11(MMP11)、基質(zhì)金屬蛋白酶9/明膠酶B(MMP-9/Gelatinase B)、基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子1(TIMP-1)、基質(zhì)金屬蛋白酶2/明膠酶A(MMP-2/Gelatinase A)、基質(zhì)金屬蛋白酶5(MMP-5)、基質(zhì)金屬蛋白酶10(MMP-10)、基質(zhì)金屬蛋白酶13(MMP-13)、基質(zhì)金屬蛋白酶7(MMP-7)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入MMP-2,再與HRP標(biāo)記的MMP-2抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的基質(zhì)基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制因子1(TIMP-1)、基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子4(TIMP-4)、基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子3(TIMP-3)、基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子2(TIMP-2)、基質(zhì)金屬蛋白酶11(MMP11)、基質(zhì)金屬蛋白酶9/明膠酶B(MMP-9/Gelatinase B)、基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子1(TIMP-1)、基質(zhì)金屬蛋白酶2/明膠酶A(MMP-2/Gelatinase A)、基質(zhì)金屬蛋白酶5(MMP-5)、基質(zhì)金屬蛋白酶10(MMP-10)、基質(zhì)金屬蛋白酶13(MMP-13)、基質(zhì)金屬蛋白酶7(MMP-7)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值),通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制因子1(TIMP-1)、基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子4(TIMP-4)、基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子3(TIMP-3)、基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子2(TIMP-2)、基質(zhì)金屬蛋白酶11(MMP11)、基質(zhì)金屬蛋白酶9/明膠酶B(MMP-9/Gelatinase B)、基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子1(TIMP-1)、基質(zhì)金屬蛋白酶2/明膠酶A(MMP-2/Gelatinase A)、基質(zhì)金屬蛋白酶5(MMP-5)、基質(zhì)金屬蛋白酶10(MMP-10)、基質(zhì)金屬蛋白酶13(MMP-13)、基質(zhì)金屬蛋白酶7(MMP-7)活性濃度。
試劑盒組成
1 | 30倍濃縮洗滌液 | 20ml×1瓶 | 7 | 終止液 | 6ml×1瓶 |
2 | 酶標(biāo)試劑 | 6ml×1瓶 | 8 | 標(biāo)準(zhǔn)品(320U/L) | 0.5ml×1瓶 |
3 | 酶標(biāo)包被板 | 12孔×8條 | 9 | 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 | 1.5ml×1瓶 |
4 | 樣品稀釋液 | 6ml×1瓶 | 10 | 說(shuō)明書(shū) | 1份 |
5 | 顯色劑A液 | 6ml×1瓶 | 11 | 封板膜 | 2張 |
6 | 顯色劑B液 | 6ml×1/瓶 | 12 | 密封袋 | 1個(gè) |
標(biāo)本要求
1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2.不能檢測(cè)含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的(HRP)活性。
操作步驟
1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋?zhuān)罕驹噭┖刑峁┰稑?biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。
160 U/L | 5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 | 150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 |
80 U/L | 4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 | 150μl的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 |
40 U/L | 3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 | 150μl的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 |
20 U/L | 2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 | 150μl的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 |
10 U/L | 1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 | 150μl的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 |
2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測(cè)樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。
7. 溫育:操作同3。
8. 洗滌:操作同5。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10分鐘.
10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
11. 測(cè)定:以空白孔調(diào)零,450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值)。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
操作程序總結(jié):
計(jì)算
以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計(jì)算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實(shí)際濃度。
注意事項(xiàng)
1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。
3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間最好控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
4. 請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,最好做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔第一孔的OD值),請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測(cè)定,計(jì)算時(shí)請(qǐng)最后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.底物請(qǐng)避光保存。
7.嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9.本試劑不同批號(hào)組分不得混用。
基質(zhì)金屬蛋白酶ELISA kit保存條件及有效期
1.試劑盒保存:;2-8℃。
2.有效期:6個(gè)月
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