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轉(zhuǎn)基因大豆MON87705品系熒光PCR試劑盒

簡(jiǎn)要描述:轉(zhuǎn)基因大豆MON87705品系熒光PCR試劑盒適用于檢測(cè)氣管分泌物拭子、肺組織等樣本中的轉(zhuǎn)基因大豆MON87705品系,用于轉(zhuǎn)基因大豆MON87705品系感染的輔助診斷,其檢測(cè)結(jié)果僅供參考。

  • 更新時(shí)間:2024-06-27
  • 廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家
  • 生產(chǎn)地址:上海
  • 訪  問(wèn)  量:695

詳細(xì)介紹

品牌YLKBIO貨號(hào)YLK10328P
規(guī)格50T供貨周期現(xiàn)貨
主要用途科研實(shí)驗(yàn)應(yīng)用領(lǐng)域化工,生物產(chǎn)業(yè)
英文名稱Diagnostic Kit for MON87705 Gene DNA (Real-Time PC保存條件-20℃避光保存
有效期12 個(gè)月注意事項(xiàng)避免反復(fù)凍融,反復(fù)凍融不能超過(guò) 5 次
標(biāo)本采集稱取 200g 樣品

轉(zhuǎn)基因大豆MON87705品系熒光PCR試劑盒

【產(chǎn)品名稱】

通用名稱:轉(zhuǎn)基因大豆MON87705品系熒光PCR試劑盒

Name:Transgenic soybean MON87705 line fluorescent PCR kit

【包裝規(guī)格】50T/盒

【預(yù)期用途】

本試劑盒適用于檢測(cè)轉(zhuǎn)基因植物的 MON87705 基因,用于篩查待檢測(cè)植物中是否含有 MON87705 成分。其檢測(cè)結(jié)果僅供參考。

【檢驗(yàn)原理】

本試劑盒用國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的 MON87705 特異性引物和探針,用熒光 PCR 技術(shù)進(jìn)行轉(zhuǎn)基因成分的檢測(cè)。

【試劑組成】

名 稱

50T/盒

MON87705反應(yīng)液

500μL×2 管

酶液

50μL×1 管

MON87705陽(yáng)性質(zhì)控品

50μL ×1 管

陰性質(zhì)控品

250μL ×1 管

說(shuō)明:不同批號(hào)的試劑盒組分不可交互使用。

【儲(chǔ)存條件及有效期】

-20℃±5℃,避光保存、運(yùn)輸、反復(fù)凍融次數(shù)不超過(guò) 5 次,有效期 12 個(gè)月。

【適用儀器】

ABI 、安捷倫 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等系列熒光定量 PCR 檢測(cè)儀。

【標(biāo)本采集】

稱取 200g 樣品。

【保存和運(yùn)輸】

上述標(biāo)本短期內(nèi)可保存于-20℃,長(zhǎng)期保存可置-70℃,但不能超過(guò) 6 個(gè)月,標(biāo)本運(yùn)送應(yīng)采用 0℃冰壺。

【使用方法】

1.  樣品處理(樣本處理區(qū))

1.1  樣本前處理

固體樣本:用粉碎機(jī)或冷凍研磨儀將樣品研磨至細(xì)粉狀。

1.2  DNA 提取

對(duì)于固體標(biāo)本,DNA 的提取可以采用 SN/T 2584-2010 中推薦的方法:

1)  每個(gè)樣品取 2 個(gè)平行管。稱取 200mg 粉碎的樣品,加入 1mL 預(yù)冷至 4℃的抽提液,劇烈搖動(dòng)混勻后,在冰上靜止 5min,4℃條件下 10000g 離心 15min,棄上清液;

2)  加入 600μL 預(yù)熱至 65℃的裂解液,充分重懸沉淀,在 65℃恒溫保持 40min,期間顛倒混勻 5 次;

3)  室溫條件下10000g 離心10min,取上清液轉(zhuǎn)移至新離心管中,加入5μLRNAseA, 37℃恒溫 30min,分別用等體積苯/酚:異戊醇溶液和三氯jia烷:異戊醇溶液各抽提一次;

4)  室溫條件下,10000g 離心 10min,取上清液至新離心管,加入三分之二體積的異丙醇,十分之一體積的 3mol/L 的乙酸鈉溶液(pH=6.5),-20℃放置 2-3h;

5)  在 4℃條件下,10000g 離心 15min,棄上清液,用 70%乙醇洗滌沉淀一次,倒出乙醇,晾干沉淀;

6)  加入 50μL TE(pH8.0)溶解沉淀,所得溶解即為樣品 DNA 溶液。也可使用等效的 DNA/提取試劑盒。

油脂樣本請(qǐng)直接選用市售油脂 DNA/提取試劑盒,按說(shuō)明操作。

2.  試劑配制(試劑準(zhǔn)備區(qū))

根據(jù)待檢測(cè)樣本總數(shù),設(shè)所需要的 PCR 反應(yīng)管管數(shù)為 N(N=樣本數(shù)+1 管陰性對(duì)照+1 管陽(yáng)性對(duì)照;樣品每滿 7 份,多配制 1 份),每測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表:

試劑

MON87705反應(yīng)液

酶液

用量

20μL

1μL




3.  加樣(樣本處理區(qū))

將步驟 1 提取的 DNA、陽(yáng)性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取 4μL,加入相應(yīng)的反應(yīng)管中,蓋好管蓋,混勻,短暫離心。

4.  PCR 擴(kuò)增(核酸擴(kuò)增區(qū))

4.1   將待檢測(cè)反應(yīng)管置于熒光定量 PCR 儀反應(yīng)槽內(nèi);

4.2   設(shè)置好通道、樣品信息,反應(yīng)體系設(shè)置為 25μL;熒光通道選擇: 檢測(cè)通道

(Reporter Dye)FAM, 淬滅通道(Quencher Dye)選擇 NONE,請(qǐng)勿選擇ROX 參比熒光。

4.3   推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置:


步驟

循環(huán)數(shù)

溫度

時(shí)間

收集熒光信號(hào)

1

1 cycle

95℃

10min

2

40 cycles

94℃

15sec

55℃

30sec







5.結(jié)果分析判定

5.1  結(jié)果分析條件設(shè)定

設(shè)置 Baseline 和 Threshold:一般直接按機(jī)器自動(dòng)分析的結(jié)果分析,當(dāng)曲線出現(xiàn)整體傾斜時(shí),根據(jù)分析后圖像調(diào)節(jié) Baseline 的 start 值(一般可在 3~15 范圍內(nèi)調(diào)節(jié))、stop 值(一般可在 5~20 范圍內(nèi)調(diào)節(jié)),以及 Threshold 的 Value 值(上下拖動(dòng)閾值線至高于陰性對(duì)照),重新分析結(jié)果。

5.2  結(jié)果判斷

陽(yáng)性:檢測(cè)通道 Ct 值≤35,且曲線有明顯的指數(shù)增長(zhǎng)曲線;

可疑:檢測(cè)通道 35<Ct 值≤38,建議重復(fù)檢測(cè),如果檢測(cè)通道仍為 35<Ct 值≤38,且曲線有明顯的增長(zhǎng)曲線,判定為陽(yáng)性,否則為陰性;

陰性:樣本檢測(cè)結(jié)果 Ct 值>38 或無(wú) Ct 值。

6.  質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)

陰性質(zhì)控品:Ct>38 或無(wú) Ct 值顯示;

陽(yáng)性質(zhì)控品:擴(kuò)增曲線有明顯指數(shù)生長(zhǎng)期,且 Ct 值≤32; 以上條件應(yīng)同時(shí)滿足,否則實(shí)驗(yàn)視為無(wú)效。

7.  檢測(cè)方法的局限性

樣本檢測(cè)結(jié)果與樣本收集、處理、運(yùn)送以及保存質(zhì)量有關(guān);

樣本提取過(guò)程中沒(méi)有控制好交叉污染,會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果;

陽(yáng)性對(duì)照、擴(kuò)增產(chǎn)物泄漏,會(huì)導(dǎo)致假陽(yáng)性結(jié)果;

病原體在流行過(guò)程中基因突變、重組,會(huì)導(dǎo)致假陰性結(jié)果;

不同的提取方法存在提取效率差異,會(huì)導(dǎo)致假陰性結(jié)果;

試劑運(yùn)輸,保存不當(dāng)或試劑配制不準(zhǔn)確引起的試劑檢測(cè)效能下降,出現(xiàn)假陰性或定量檢測(cè)不準(zhǔn)確的結(jié)果;

本檢測(cè)結(jié)果僅供參考,如須確診請(qǐng)結(jié)合臨床癥狀以及其他檢測(cè)手段。

【注意事項(xiàng)】

所有操作嚴(yán)格按照說(shuō)明書進(jìn)行;

試劑盒內(nèi)各種組分使用前應(yīng)自然融化,wan全混勻并短暫離心;

反應(yīng)液應(yīng)避光保存;

反應(yīng)中盡量避免氣泡存在,管蓋需蓋緊;

使用一次性吸頭、一次性手套和各區(qū)專用工作服;

樣本處理、試劑配制、加樣需在不同區(qū)進(jìn)行,以免交叉污染;

實(shí)驗(yàn)完畢后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外燈處理工作臺(tái)和移液器;

試劑盒里所有物品應(yīng)視為污染物對(duì)待,并按照《微生物生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室生物安全通則》進(jìn)行處理。


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