簡(jiǎn)要描述:轉(zhuǎn)基因大豆MON87705品系熒光PCR試劑盒適用于檢測(cè)氣管分泌物拭子、肺組織等樣本中的轉(zhuǎn)基因大豆MON87705品系,用于轉(zhuǎn)基因大豆MON87705品系感染的輔助診斷,其檢測(cè)結(jié)果僅供參考。
詳細(xì)介紹
品牌 | YLKBIO | 貨號(hào) | YLK10328P |
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規(guī)格 | 50T | 供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
主要用途 | 科研實(shí)驗(yàn) | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工,生物產(chǎn)業(yè) |
英文名稱 | Diagnostic Kit for MON87705 Gene DNA (Real-Time PC | 保存條件 | -20℃避光保存 |
有效期 | 12 個(gè)月 | 注意事項(xiàng) | 避免反復(fù)凍融,反復(fù)凍融不能超過(guò) 5 次 |
標(biāo)本采集 | 稱取 200g 樣品 |
轉(zhuǎn)基因大豆MON87705品系熒光PCR試劑盒
【產(chǎn)品名稱】
通用名稱:轉(zhuǎn)基因大豆MON87705品系熒光PCR試劑盒
Name:Transgenic soybean MON87705 line fluorescent PCR kit
【包裝規(guī)格】50T/盒
【預(yù)期用途】
本試劑盒適用于檢測(cè)轉(zhuǎn)基因植物的 MON87705 基因,用于篩查待檢測(cè)植物中是否含有 MON87705 成分。其檢測(cè)結(jié)果僅供參考。
【檢驗(yàn)原理】
本試劑盒用國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的 MON87705 特異性引物和探針,用熒光 PCR 技術(shù)進(jìn)行轉(zhuǎn)基因成分的檢測(cè)。
【試劑組成】
名 稱 | 50T/盒 |
MON87705反應(yīng)液 | 500μL×2 管 |
酶液 | 50μL×1 管 |
MON87705陽(yáng)性質(zhì)控品 | 50μL ×1 管 |
陰性質(zhì)控品 | 250μL ×1 管 |
說(shuō)明:不同批號(hào)的試劑盒組分不可交互使用。
【儲(chǔ)存條件及有效期】
-20℃±5℃,避光保存、運(yùn)輸、反復(fù)凍融次數(shù)不超過(guò) 5 次,有效期 12 個(gè)月。
【適用儀器】
ABI 、安捷倫 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等系列熒光定量 PCR 檢測(cè)儀。
【標(biāo)本采集】
稱取 200g 樣品。
【保存和運(yùn)輸】
上述標(biāo)本短期內(nèi)可保存于-20℃,長(zhǎng)期保存可置-70℃,但不能超過(guò) 6 個(gè)月,標(biāo)本運(yùn)送應(yīng)采用 0℃冰壺。
【使用方法】
1. 樣品處理(樣本處理區(qū))
1.1 樣本前處理
固體樣本:用粉碎機(jī)或冷凍研磨儀將樣品研磨至細(xì)粉狀。
1.2 DNA 提取
對(duì)于固體標(biāo)本,DNA 的提取可以采用 SN/T 2584-2010 中推薦的方法:
1) 每個(gè)樣品取 2 個(gè)平行管。稱取 200mg 粉碎的樣品,加入 1mL 預(yù)冷至 4℃的抽提液,劇烈搖動(dòng)混勻后,在冰上靜止 5min,4℃條件下 10000g 離心 15min,棄上清液;
2) 加入 600μL 預(yù)熱至 65℃的裂解液,充分重懸沉淀,在 65℃恒溫保持 40min,期間顛倒混勻 5 次;
3) 室溫條件下10000g 離心10min,取上清液轉(zhuǎn)移至新離心管中,加入5μLRNAseA, 37℃恒溫 30min,分別用等體積苯/酚:異戊醇溶液和三氯jia烷:異戊醇溶液各抽提一次;
4) 室溫條件下,10000g 離心 10min,取上清液至新離心管,加入三分之二體積的異丙醇,十分之一體積的 3mol/L 的乙酸鈉溶液(pH=6.5),-20℃放置 2-3h;
5) 在 4℃條件下,10000g 離心 15min,棄上清液,用 70%乙醇洗滌沉淀一次,倒出乙醇,晾干沉淀;
6) 加入 50μL TE(pH8.0)溶解沉淀,所得溶解即為樣品 DNA 溶液。也可使用等效的 DNA/提取試劑盒。
油脂樣本請(qǐng)直接選用市售油脂 DNA/提取試劑盒,按說(shuō)明操作。
2. 試劑配制(試劑準(zhǔn)備區(qū))
根據(jù)待檢測(cè)樣本總數(shù),設(shè)所需要的 PCR 反應(yīng)管管數(shù)為 N(N=樣本數(shù)+1 管陰性對(duì)照+1 管陽(yáng)性對(duì)照;樣品每滿 7 份,多配制 1 份),每測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表:
試劑 | MON87705反應(yīng)液 | 酶液 |
用量 | 20μL | 1μL |
3. 加樣(樣本處理區(qū))
將步驟 1 提取的 DNA、陽(yáng)性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取 4μL,加入相應(yīng)的反應(yīng)管中,蓋好管蓋,混勻,短暫離心。
4. PCR 擴(kuò)增(核酸擴(kuò)增區(qū))
4.1 將待檢測(cè)反應(yīng)管置于熒光定量 PCR 儀反應(yīng)槽內(nèi);
4.2 設(shè)置好通道、樣品信息,反應(yīng)體系設(shè)置為 25μL;熒光通道選擇: 檢測(cè)通道
(Reporter Dye)FAM, 淬滅通道(Quencher Dye)選擇 NONE,請(qǐng)勿選擇ROX 參比熒光。
4.3 推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置:
步驟 | 循環(huán)數(shù) | 溫度 | 時(shí)間 | 收集熒光信號(hào) |
1 | 1 cycle | 95℃ | 10min | 否 |
2 | 40 cycles | 94℃ | 15sec | 否 |
55℃ | 30sec | 是 |
5.結(jié)果分析判定
5.1 結(jié)果分析條件設(shè)定
設(shè)置 Baseline 和 Threshold:一般直接按機(jī)器自動(dòng)分析的結(jié)果分析,當(dāng)曲線出現(xiàn)整體傾斜時(shí),根據(jù)分析后圖像調(diào)節(jié) Baseline 的 start 值(一般可在 3~15 范圍內(nèi)調(diào)節(jié))、stop 值(一般可在 5~20 范圍內(nèi)調(diào)節(jié)),以及 Threshold 的 Value 值(上下拖動(dòng)閾值線至高于陰性對(duì)照),重新分析結(jié)果。
5.2 結(jié)果判斷
陽(yáng)性:檢測(cè)通道 Ct 值≤35,且曲線有明顯的指數(shù)增長(zhǎng)曲線;
可疑:檢測(cè)通道 35<Ct 值≤38,建議重復(fù)檢測(cè),如果檢測(cè)通道仍為 35<Ct 值≤38,且曲線有明顯的增長(zhǎng)曲線,判定為陽(yáng)性,否則為陰性;
陰性:樣本檢測(cè)結(jié)果 Ct 值>38 或無(wú) Ct 值。
6. 質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)
陰性質(zhì)控品:Ct>38 或無(wú) Ct 值顯示;
陽(yáng)性質(zhì)控品:擴(kuò)增曲線有明顯指數(shù)生長(zhǎng)期,且 Ct 值≤32; 以上條件應(yīng)同時(shí)滿足,否則實(shí)驗(yàn)視為無(wú)效。
7. 檢測(cè)方法的局限性
樣本檢測(cè)結(jié)果與樣本收集、處理、運(yùn)送以及保存質(zhì)量有關(guān);
樣本提取過(guò)程中沒(méi)有控制好交叉污染,會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果;
陽(yáng)性對(duì)照、擴(kuò)增產(chǎn)物泄漏,會(huì)導(dǎo)致假陽(yáng)性結(jié)果;
病原體在流行過(guò)程中基因突變、重組,會(huì)導(dǎo)致假陰性結(jié)果;
不同的提取方法存在提取效率差異,會(huì)導(dǎo)致假陰性結(jié)果;
試劑運(yùn)輸,保存不當(dāng)或試劑配制不準(zhǔn)確引起的試劑檢測(cè)效能下降,出現(xiàn)假陰性或定量檢測(cè)不準(zhǔn)確的結(jié)果;
本檢測(cè)結(jié)果僅供參考,如須確診請(qǐng)結(jié)合臨床癥狀以及其他檢測(cè)手段。
【注意事項(xiàng)】
所有操作嚴(yán)格按照說(shuō)明書進(jìn)行;
試劑盒內(nèi)各種組分使用前應(yīng)自然融化,wan全混勻并短暫離心;
反應(yīng)液應(yīng)避光保存;
反應(yīng)中盡量避免氣泡存在,管蓋需蓋緊;
使用一次性吸頭、一次性手套和各區(qū)專用工作服;
樣本處理、試劑配制、加樣需在不同區(qū)進(jìn)行,以免交叉污染;
實(shí)驗(yàn)完畢后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外燈處理工作臺(tái)和移液器;
試劑盒里所有物品應(yīng)視為污染物對(duì)待,并按照《微生物生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室生物安全通則》進(jìn)行處理。
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