欧美日韩高青不卡在线一区二区,欲香欲色天天影视大全,首页-老汉色最新网站,91精品国产91,a片在线视频免费观看网址,免费无遮羞大尺寸的动漫片

您好!歡迎訪問優(yōu)利科(上海)生命科學(xué)有限公司網(wǎng)站!
全國服務(wù)咨詢熱線:

15021281375

當(dāng)前位置:首頁 > 資料下載 > 單脫氫抗壞血酸還原酶(MDHAR)試劑盒說明書

單脫氫抗壞血酸還原酶(MDHAR)試劑盒說明書

發(fā)布時(shí)間:2023/10/30      點(diǎn)擊次數(shù):263

單脫氫抗壞血酸還原酶MDHAR活性測定試劑盒說明書

                                                   微量法100T/96S

 

    意:正式測定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。

測定意義:

MDHAR催化MDHA還原生成AsA,在抗壞血酸氧化還原代謝中具有重要作用。

 

測定原理:

MDHAR 催化 NADH 還原MDHA 生成 AsANAD+NADH340 nm有特征吸收峰,但是NAD+沒有。通過測定340 nm光吸收下降速率,來計(jì)算出MDHAR活性。

 

實(shí)驗(yàn)中所需儀器及設(shè)備:

研缽、冰、臺(tái)式離心機(jī)、紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、可調(diào)式移液槍和雙蒸水

 

試劑組成和配置:

試劑一:液體100mL×1瓶,4℃保存。

試劑二:液體20mL×1瓶,室溫保存。

試劑三:粉劑×1瓶(棕色),4℃保存。臨用前加入3 mL蒸餾水充分溶解。

試劑四:粉劑×1瓶,4℃保存。臨用前加入2.5 mL蒸餾水充分溶解。

試劑五:液體15μL×1瓶,4℃保存。臨用前加3 mL試劑二充分溶解。

 

粗酶液提取:

1.        組織:按照組織質(zhì)量(g:試劑一體(mL)15~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一)進(jìn)行冰浴勻漿。8000g,4離心10min,取上清置冰上待測。

2.        . 細(xì)菌、真菌:按照細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):試劑一體積(mL)為500~10001的比例(建議500萬細(xì)胞加入1mL試劑一),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時(shí)間3min);8000g ,4離心20min,取上清液置冰上混勻待測。

3.  血清等液體:直接測定。

 

MDHAR測定操作:

1. 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30 min,調(diào)節(jié)波長到340 nm,蒸餾水調(diào)零。

2. 試劑二在25℃水浴鍋中預(yù)熱30 min。

3.依次在微量石英比色皿/96孔板中加入20μL試劑三、20μL試劑四、20μL試劑五和120μL試劑二,最后加入20μL上清液,迅速混勻后于340nm比色,記錄30s150s的吸光值30s150s的吸光值A1A2,A=A1-A2。

 

MDHAR活性計(jì)算公式:

a.使用微量石英比色皿測定的計(jì)算公式如下

(1). 按蛋白濃度計(jì)算

MDHAR活性單位定義:25℃中每毫克蛋白每分鐘氧化1nmol NADH 1個(gè)酶活單位。

 

MDHAR (nmol/min /mg prot) = A÷ε÷d×V反總×109Cpr×V樣)÷T

= 804×A ÷Cpr

(2). 按樣本質(zhì)量計(jì)算

MDHAR活性單位定義:25℃中每克樣本每分鐘氧化1nmol NADH 1U。

MDHAR (nmol/min /g 鮮重) = A÷ε÷d×V反總×109W×V÷V樣總÷T

= 804×A ÷W

3)按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

MDHAR活性單位定義:25℃中每104個(gè)細(xì)胞每分鐘氧化1nmol NADH 1個(gè)酶活單位。

MDHAR (nmol/min/104 cell) = A÷ε÷d×V反總×109÷細(xì)胞數(shù)量×V÷V樣總÷T

= 804×A ÷ 細(xì)胞數(shù)量

4)按液體體積計(jì)算

MDHAR活性單位定義:25℃中每毫升液體每分鐘氧化1nmol NADH 1個(gè)酶活單位。

MDHAR (nmol/min /mL) = A÷ε÷d×V反總×109÷V樣)÷T

= 804×A

εNADH摩爾消光系數(shù),6220 L/mol/cm;d:比色皿光徑,1cm;V反總:反應(yīng)體系總體積,0.2mL=2×10-4L;V樣:加入反應(yīng)體系中上清液體積,20μL=0.02mLV樣總:提取液體積,1 mLCpr:上清液蛋白濃度,mg/mL,蛋白質(zhì)濃度需要另外測定,建議使用本公司蛋白質(zhì)含量BCA試劑盒;W :樣品質(zhì)量;T:反應(yīng)時(shí)間,2min。

 

b.使用96孔板測定的計(jì)算公式如下:

(1). 按蛋白濃度計(jì)算

MDHAR活性單位定義:25℃中每毫克蛋白每分鐘氧化1nmol NADH 1個(gè)酶活單位。

MDHAR (nmol/min /mg prot) = A÷ε÷d×V反總×109Cpr×V樣)÷T

= 1608×A ÷Cpr

(2). 按樣本質(zhì)量計(jì)算

MDHAR活性單位定義:25℃中每克樣本每分鐘氧化1nmol NADH 1U

MDHAR (nmol/min /g 鮮重) = A÷ε÷d×V反總×109W×V÷V樣總÷T

= 1608×A ÷W

3)按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

MDHAR活性單位定義:25℃中每104個(gè)細(xì)胞每分鐘氧化1nmol NADH 1個(gè)酶活單位。

MDHAR (nmol/min/104 cell) = A÷ε÷d×V反總×109÷細(xì)胞數(shù)量×V÷V樣總÷T

= 1608×A ÷ 細(xì)胞數(shù)量

4)按液體體積計(jì)算

MDHAR活性單位定義:25℃中每毫升液體每分鐘氧化1nmol NADH 1個(gè)酶活單位。

MDHAR (nmol/min /mL) = A÷ε÷d×V反總×109÷V樣)÷T

=1608×A

εNADH摩爾消光系數(shù),6220 L/mol/cm;d96孔板光徑,0.5cm;V反總:反應(yīng)體系總體積,0.2mL=2×10-4L;V樣:加入反應(yīng)體系中上清液體積,20μL=0.02mL;V樣總:提取液體積,1 mL;Cpr:上清液蛋白濃度,mg/mL,蛋白質(zhì)濃度需要另外測定,建議使用本公司蛋白質(zhì)含量BCA試劑盒;W :樣品質(zhì)量;T:反應(yīng)時(shí)間,2min。

 

注意事項(xiàng):

 

臨用前配制的試劑未使用完的4保存,3天內(nèi)使用完。


文件下載    圖片下載    
優(yōu)利科(上海)生命科學(xué)有限公司
地址:金大公路8218號(hào)1幢
郵箱:1431486511@qq.com
傳真:
關(guān)注我們
歡迎您關(guān)注我們的微信公眾號(hào)了解更多信息:
歡迎您關(guān)注我們的微信公眾號(hào)
了解更多信息
五大连池市| 锦屏县| 东乡| 富民县| 大埔区| 西乡县| 庆阳市| 禄丰县| 开化县| 泉州市| 东至县| 渝北区| 宁国市| 东辽县| 宜兴市| 江阴市| 新郑市| 柳河县| 工布江达县| 珲春市| 沙雅县| 建湖县| 襄汾县| 武安市| 时尚| 河津市| 道真| 莱州市| 临湘市| 尉氏县| 鹿邑县| 焦作市| 黔南| 电白县| 府谷县| 旺苍县| 乌兰察布市| 阿鲁科尔沁旗| 台山市| 武威市| 宁城县|