植物銨態(tài)氮試劑盒說(shuō)明書

                                                微量法100T/96S

注    意：正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。

測(cè)定意義：

氮素是構(gòu)成生物體的一種必需元素，自然界中的氮素循環(huán)包括許多轉(zhuǎn)化作用。空氣中的氮?dú)獗还痰⑸锛爸参锱c微生物的共生體固定成氨態(tài)氮，經(jīng)過(guò)硝化微生物的作用轉(zhuǎn)化成硝態(tài)氮，后者被植物或微生物同化成有機(jī)氮化物，植物組織氨氮含量可反映植物受脅迫的程度。

測(cè)定原理：

α-氨基酸與水合茚三酮溶液一起加熱，經(jīng)氧化脫氨變成相應(yīng)的α-酮酸，酮酸進(jìn)一步脫羧變成醛，水合茚三酮?jiǎng)t被還原，在弱酸環(huán)境中，還原型茚三酮，氨和另一分子水合茚三酮反應(yīng)， 縮合生成藍(lán)紫色物質(zhì)，在580nm處有特征吸收峰。

自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器：

天平、研缽、常溫離心機(jī)、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、恒溫水浴鍋。

試劑組成和配制：

提取液：液體100mL×1瓶，4℃保存。

試劑一：液體9mL×1瓶，4℃保存。

試劑二：粉劑×1瓶，4℃避光保存。臨用前加1.5mL蒸餾水充分溶解。

試劑三：液體15mL×1瓶，4℃保存。

樣本處理：

按照質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g，加入1mL提取液）加入提取液，室溫勻漿后于25℃，12000g離心10min，取上清待測(cè)。

測(cè)定操作表：

注意：空白管只需測(cè)定一次。

計(jì)算公式：

a.      用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)曲線：y=0.1535x-0.0279，R²=0.9993

NH₄⁺—N含量（μg/g 鮮重）=（△A+0.0279）÷ 0.1535×V反總÷（W×V樣÷V樣總）

               = 32.9×（△A+0.0279）÷W

V反總：反應(yīng)總體積，0.315mL；V樣：反應(yīng)體系中加入樣本體積，0.06mL；V樣總：加入提取液體積，1mL，W：樣本質(zhì)量，g

a.        用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)曲線：y=0.0768x-0.0279，R²=0.9993

NH₄⁺—N含量（μg/g 鮮重）=（△A+0.0279）÷ 0.0768×V反總÷（W×V樣÷V樣總）

               = 65.8×（△A+0.0279）÷W

V反總：反應(yīng)總體積，0.315mL；V樣：反應(yīng)體系中加入樣本體積，0.06mL；V樣總：加入提取液體積，1mL，W：樣本質(zhì)量，g

注意事項(xiàng)：

1.        提取好的待測(cè)液盡快測(cè)定，低溫保存不得超過(guò)24小時(shí)。

2.        沸水浴時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)，否則會(huì)對(duì)測(cè)定結(jié)果有影響。

3.        顯色后20min內(nèi)完成測(cè)定。

4.        Z低檢出限為18μg/g。