細(xì)胞培養(yǎng)操作步驟：（供參考）

吸走多余培養(yǎng)基，加入3-5mL PBS后輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)瓶潤(rùn)洗細(xì)胞；

吸干凈PBS后加入1mL0.25%胰酶-0.53mM EDTA，輕輕搖晃培養(yǎng)皿使胰酶浸沒(méi)細(xì)胞表面，培養(yǎng)瓶放37度培養(yǎng)箱消化；（細(xì)胞對(duì)于消化比較敏感，消化過(guò)度會(huì)嚴(yán)重影響細(xì)胞狀態(tài)，導(dǎo)致細(xì)胞傳代死亡漂浮或者傳代后不長(zhǎng)。細(xì)胞消化到細(xì)胞間隙變大但未脫落，可以輕輕吹下時(shí)即可終止，禁止消化到細(xì)胞漂浮?；靹蚣?xì)胞時(shí)盡量輕柔，不要吹出大量氣泡。）

加入6-8ml培養(yǎng)基終止消化，輕輕吹下細(xì)胞混勻；

將混勻的細(xì)胞1000rpm（約150g）離心3min，棄上清，再用新鮮培養(yǎng)基重懸37度培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)(建議T25瓶加10-12ml培養(yǎng)基，10cm皿加12-15ml)；傳代比例: 不同細(xì)胞生長(zhǎng)速度不一，具體傳代比例視細(xì)胞生長(zhǎng)速度而定，大部分細(xì)胞適用1：3-1：4傳代，生長(zhǎng)較慢的細(xì)胞可以1：2傳代。

細(xì)胞冷凍保存：

1.凍存液：92%培養(yǎng)基+8%DMSO（可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)室條件自行選擇）。

2.降溫步驟：4度10min，-20度2h，-80過(guò)夜后液氮保存。