酶聯(lián)免疫分析試劑盒是酶免疫測定技術(shù)中應(yīng)用廣的技術(shù)。其基本方法是將已知抗原或抗體吸附在固相載體表面,使酶標(biāo)記的抗原抗體在固相表面反應(yīng),并通過洗滌洗滌液相中的游離組分。常用的ELISA方法包括雙抗體夾心法和間接法。前者用于檢測大分子抗原,后者用于確定特異性抗體。
酶聯(lián)免疫分析試劑盒作用的基本原理是指酶分子與抗體或抗抗體分子的共價(jià)結(jié)合,不會(huì)改變抗體的免疫學(xué)特性,不會(huì)影響酶的生物活性。酶標(biāo)記抗體可以特異性結(jié)合吸附在固相載體上的抗原或抗體。滴下底物溶液后,在酶的作用下,底物中所含的氫供體可由無色還原態(tài)轉(zhuǎn)變?yōu)橛猩趸瘧B(tài),并發(fā)生顯色反應(yīng)。相應(yīng)免疫反應(yīng)的存在或不存在可以通過底物的顏色反應(yīng)來確定。顯色反應(yīng)與樣品中相應(yīng)抗體或抗原的量成正比。這種顯色反應(yīng)可以用ELISA檢測器定量測定,它結(jié)合了酶化學(xué)反應(yīng)的敏感性和抗原抗體反應(yīng)的特異性,使ELISA成為一種特異、靈敏的檢測方法。
酶聯(lián)免疫分析試劑盒取用規(guī)范:
1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取山應(yīng)在空溫平衡十五到三十分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。
3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間最好控制在五分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
4.請(qǐng)每次測定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,最好做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高,請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)后再測定,計(jì)算時(shí)請(qǐng)最后乘以總稀釋倍數(shù)。
5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。底物請(qǐng)避光保存。