對(duì)于熒光PCR檢測(cè)試劑盒很多人做過(guò)不少的了解,但還是要跟大家再分享一下,本產(chǎn)品的特性和原理和作用流程:
高靈敏度:它可以量化低拷貝或多樣性模板。
特異性強(qiáng):利用熱啟動(dòng)酶的激活機(jī)制抑制非特異性擴(kuò)增。
重復(fù)性好:放大曲線(xiàn)符合度高,受干擾影響小。
放大效率高:放大曲線(xiàn)CT值低,峰值啟動(dòng)快,效率高。
原理:所謂實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù),是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號(hào)的積累實(shí)時(shí)監(jiān)控整個(gè)PCR過(guò)程,然后通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。
熒光PCR檢測(cè)試劑盒操作流程:
1、整個(gè)檢測(cè)過(guò)程應(yīng)嚴(yán)格按照本手冊(cè)的要求在試劑制備區(qū)、樣品處理區(qū)和PCR擴(kuò)增區(qū)進(jìn)行操作。各區(qū)域的實(shí)驗(yàn)服、儀器、耗材應(yīng)單獨(dú)使用,不得混用;實(shí)驗(yàn)采用帶濾芯的吸入頭;樣品處理區(qū)應(yīng)配備生物安全柜,樣品處理應(yīng)在生物安全柜內(nèi)進(jìn)行;三個(gè)區(qū)域應(yīng)配備紫外線(xiàn)滅菌裝置。
2、為了避免RNA降解,樣品處理過(guò)程應(yīng)在0-4℃下操作,并在實(shí)驗(yàn)后立即進(jìn)行測(cè)試;樣品處理中使用的儀器和耗材應(yīng)不含核酶。
3、每次實(shí)驗(yàn)應(yīng)設(shè)陰性對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照。
4、試劑盒中的所有試劑在使用前應(yīng)在室溫下充分熔化和混合,并應(yīng)立即離心。
5、試劑盒中的所有陰性對(duì)照品和陽(yáng)性對(duì)照品應(yīng)轉(zhuǎn)移到標(biāo)本制備區(qū),并在一次使用前單獨(dú)存放。
6、為防止熒光干擾,避免徒手直接接觸PCR反應(yīng)管,避免PCR反應(yīng)管上有任何標(biāo)記。